H9亞型禽流感在雛雞和青年雞群的流行病學(xué)調(diào)查和防制
王群義 欒棟祖、劉東、李彬、劉平、劉紅祥、王宗升、劉曉東、馬東、國(guó)平
2010年2月份至今，在山東、廣東、遼寧、浙江等地的一些白羽肉雞、三黃雞和15-70日齡的商品蛋雞流行一種以咳嗽、呼嚕、怪叫和張口喘為主要特征的急性傳染病，為了解此病的流行特征，開(kāi)展此項(xiàng)工作，現(xiàn)將調(diào)查情況報(bào)告如下。
1 流行情況調(diào)查
1.1 調(diào)查時(shí)間 2010年2月至2011年2月底。
1.2 調(diào)查方法
1.2.1 就診病例 對(duì)前往青島易邦生物工程有限公司門(mén)診就診的病例，詳細(xì)了解記錄雞群發(fā)病過(guò)程及發(fā)病前后雞場(chǎng)免疫、用藥情況，現(xiàn)場(chǎng)剖檢觀察病理變化，并采集有典型病變的組織用PCR方法或接種雞胚的方法檢測(cè)是否感染了禽流感（H9N2）。
1.2.2 發(fā)病現(xiàn)場(chǎng)調(diào)查 青島易邦生物工程有限公司的技術(shù)服務(wù)人員前往發(fā)病雞場(chǎng)實(shí)地調(diào)查發(fā)病情況，調(diào)查內(nèi)容同1.2.1。
1.2.3全國(guó)部分養(yǎng)殖公司發(fā)送青島易邦公司的病料。調(diào)查內(nèi)容同1.2.1
1.3調(diào)查范圍 發(fā)病雞群主要來(lái)自山東、河南、河北、遼寧、廣東、廣西、江蘇、湖南、天津、浙江等省市的養(yǎng)雞密集地區(qū)。
1.4 調(diào)查病例分布情況 我們共調(diào)查有類似癥狀的病例352批（場(chǎng)），各省市病例數(shù)量及發(fā)病雞群初發(fā)日齡分布情況見(jiàn)表1.
表1 被調(diào)查病例分布情況
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調(diào)查地點(diǎn)
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白羽肉雞
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蛋雞
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三黃雞或麻黃
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病例數(shù)
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日齡
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病例數(shù)
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日齡
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病例數(shù)
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日齡
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山東
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167
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15-30
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59
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35-80
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5
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35
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廣東
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--
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--
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23
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20-60
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廣西
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--
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--
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--
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--
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2
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35
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浙江
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--
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--
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2
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33
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2
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45
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江蘇
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--
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--
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8
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35-60
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3
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43
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湖南
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---
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--
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3
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70
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--
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--
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湖北
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--
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--
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4
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65
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--
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--
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河南
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--
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--
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6
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40-80
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--
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河北
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8
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20-30
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11
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20-50
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天津
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8
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20-30
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--
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--
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--
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合計(jì)
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2 主要流行特點(diǎn)
2.1 季節(jié)性明顯：2010年11月，遼寧、河北、山東等地的雞群發(fā)病率逐漸增加，12月份該病在山東的發(fā)病率達(dá)到高峰；1月份廣東、浙江、廣西、江西等地的發(fā)病率呈增高趨勢(shì)。
2.2 在已調(diào)查的雞場(chǎng)中，90%的雞群都免疫過(guò)禽流感（H9）油苗，免疫不同公司的雞新城疫-禽流感（H9）二聯(lián)油苗的雞群，發(fā)病率和死亡率差別較大，但都不能完全阻止該病的發(fā)生。
2.3 傳播速度、發(fā)病程度和死淘率與飼養(yǎng)管理密切相關(guān)；管理好的雞場(chǎng)，發(fā)病率較低，發(fā)病日齡推遲，死淘率較低。有些管理不好的雞場(chǎng)在25日齡不得不提前淘汰。
2.4 抗生素治療無(wú)效。
3 臨床癥狀
3.1病雞主要表現(xiàn)以咳嗽、呼嚕、噴嚏、張口呼吸，怪叫為主的呼吸道癥狀；病雞精神不振，頭插翅膀下，拉黃白色糞便，采食量下降幅度可達(dá)10-20%。一般病程為10-15天。死亡率較高達(dá)10-20%。
3.2白羽肉雞的臨床表現(xiàn)較為嚴(yán)重，大群表現(xiàn)采食、飲水廢絕，精神萎靡，部分雞群不得不提前出欄。
3.3商品蛋雛雞和商品蛋中雞的癥狀較輕，以呼吸道為主，采食飲水變化不大，病程長(zhǎng)達(dá)1個(gè)月左右。
4 病理變化
4.1白羽肉雞和三黃雞：病雞氣管充出血，內(nèi)有血痰，干酪物或黃白色粘液，主要集中在氣管中下段；支氣管充出血，內(nèi)有干酪物堵塞；部分雞腺胃腫脹，腺胃乳頭出血。
4.2商品蛋雞青年雞鼻腔黏膜潮紅，內(nèi)有膿性分泌物；氣管內(nèi)有分泌物。
5 病毒分離及PCR鑒定
5.1 部分病料病毒分離情況 ：所取病料經(jīng)處理接種11日齡SPF雞胚，并定時(shí)照蛋，將死亡的雞胚收獲，并檢測(cè)血凝價(jià)，禽流感（H5N1、H9N2及H7亞型）及陽(yáng)性血清、新城疫及陽(yáng)性血清對(duì)有血凝價(jià)的尿囊液進(jìn)行鑒定，H9分離結(jié)果如下：
表1 H9病毒分離情況
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調(diào)查地點(diǎn)
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白羽肉雞
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蛋雞
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三黃雞或麻黃
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山東
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134/167
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38/59
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5/5
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廣東
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--
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15/22
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廣西
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--
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--
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2/2
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浙江
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--
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1/2
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1/2
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江蘇
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--
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3/8
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3/3
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湖南
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---
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3/3
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湖北
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2/4
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--
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河南
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--
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2/6
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河北
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8
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5/11
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天津
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5/8
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合計(jì)
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5.2 RT-PCR鑒定： 從來(lái)自山東、廣東、遼寧等地疑似H9的尿囊液中提取RNA并反轉(zhuǎn)錄為DNA作為模板,進(jìn)行聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（RT-PCR）。按照常規(guī)方法進(jìn)行PCR , 反應(yīng)參數(shù)為94 ℃預(yù)變性5min ,然后進(jìn)入94 ℃變性30 s ,55 ℃退火30 s 和72℃延伸2 min 的29個(gè)循環(huán)，4 ℃保存。反應(yīng)結(jié)束后取5μL PCR 產(chǎn)物,用10 g/ L 的瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)擴(kuò)增結(jié)果。
選取來(lái)自山東、廣東、遼寧等地的近十株分離毒，進(jìn)行基因序列分析。我們發(fā)現(xiàn)，近期分離到的H9亞型禽流感存在HA核酸序列變異現(xiàn)象，目前流行的H9亞型毒株與青島易邦公司的疫苗毒株H9V-YBF003的同源率可達(dá)98%以上，并且該基因序列與易邦公司研發(fā)的禽流感-新城疫重組二聯(lián)活疫苗（rL-H9）中的H9保護(hù)性抗原的基因序列同源性高。
6 治療方案的探討
一般發(fā)病初期治療效果較為理想；白羽肉雞的治療效果較差；
卡那霉素2-5萬(wàn)單位/只，大群飲水；
飼料中添加萬(wàn)分之二的氨茶堿或在飲水中加萬(wàn)分之五的氯化銨；
安乃近10毫克/千克體重連用5天；
7 肉雞“新支靈”對(duì)H9亞型禽流感的防治效果反饋
7.1 2010年12月份以來(lái)，山東、北京、遼寧幾個(gè)白羽肉雞養(yǎng)殖公司開(kāi)始免疫肉雞新支靈，從目前的免疫效果來(lái)看，免疫效果良好，特別是山東的幾個(gè)肉雞公司，完全控制住了H9亞型禽流感的發(fā)病和流行。
7.2 2011年1月， 廣東某三黃雞養(yǎng)殖公司，60日齡的雞群發(fā)生H9亞型禽流感，死亡率達(dá)10%左右。發(fā)病后對(duì)雞場(chǎng)中所有的未發(fā)病雞群（15日齡、30日齡、45日齡共三批雞）2羽份緊急接種，免疫后至今該場(chǎng)沒(méi)發(fā)生H9亞型禽流感。
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