常見(jiàn)的幾種禽病毒病采樣技術(shù)

　　在防治畜禽疾病中，很多畜禽傳染病的臨床癥狀不明顯，單憑臨床經(jīng)驗(yàn)是難以做到確切診斷、準(zhǔn)確用藥，往往因此而貽誤了病情。為此，需要通過(guò)從病畜或尸體采取病料，進(jìn)一步做微生物學(xué)和血清學(xué)化驗(yàn)，查清病原，進(jìn)而有針對(duì)性地采取相應(yīng)的防治措施，以達(dá)到預(yù)防、控制和撲滅傳染病的目的，同時(shí)減少臨床工作的盲目性，提高獸醫(yī)人員的技術(shù)水平，保護(hù)養(yǎng)殖戶的利益。而病料采集、保存、送檢的方法是否正確，直接影響到檢驗(yàn)的結(jié)果和防治工作的開(kāi)展，故采集檢測(cè)樣品是診斷檢測(cè)工作的重要內(nèi)容，另外采樣的時(shí)機(jī)是否適宜，樣品是否具有代表性，樣品處理、保存、運(yùn)送是否及時(shí)等，都會(huì)影響到檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。

　　下面就如何正確地采集、保存、送檢病料等進(jìn)行歸納和整理，希望能夠?qū)鶎荧F醫(yī)和養(yǎng)殖戶提供一些借鑒。

　　一、采集原則 

　　1，新鮮、具代表性，且足量：采集死禽樣本，夏天6小時(shí)之內(nèi)完成，冬天在24小時(shí)之內(nèi)完成；采集樣品的數(shù)量要滿足診斷檢測(cè)的需要，并留有余地，以備必要時(shí)復(fù)檢使用。

　　2，減少對(duì)病料的污染：在做尸體剖檢時(shí)，應(yīng)將尸體浸泡在消毒劑溶液中，防止羽毛及皮屑飛揚(yáng)對(duì)病料造成的污染；病料采集時(shí)，對(duì)采集病料的器械及容器必須提前消毒，減少因器械或盛放病料的容器對(duì)病料的污染；尸體剖開(kāi)腹腔時(shí)，第一時(shí)間采取病料，減少病料因暴露于空氣中而造成的污染。

　　3，典型采樣：選取未經(jīng)藥物治療、癥狀最典型或病變最明顯的樣品，如有并發(fā)癥，還應(yīng)兼顧采樣。

　　4，合理采樣：根據(jù)診斷檢測(cè)的要求，須嚴(yán)格按照規(guī)定采集各種足夠數(shù)量的樣品外，不同疫病的需檢樣品各異，應(yīng)按可能的疫病側(cè)重采樣。對(duì)未能確定為何種疫病的，應(yīng)全面采樣。

　　5，安全采樣：既要保護(hù)采樣人員，以要防止病原外泄，還要防止樣品受到污染。

　　6，迅速送檢：應(yīng)盡快送實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行檢測(cè)，延誤送檢時(shí)間，會(huì)影響到檢測(cè)質(zhì)量和結(jié)果的可靠性。

　　二、病料的采集方法

　　1，組織和實(shí)質(zhì)器官的采集：剖開(kāi)腹腔后，必須注意腸管的完整。如需進(jìn)行細(xì)菌的分離培養(yǎng)，要以燒紅的手術(shù)刀片燙烙臟器表面，使用經(jīng)火焰滅菌的接種針插入燙烙的部位，提取少量的組織或液體，作涂片鏡檢或接種于培養(yǎng)基上，進(jìn)行培養(yǎng)。

　　2，液體病料的采集：采集血液、膽汁、膿腫液、滲出物等液體病料，使用滅菌吸管或注射器，經(jīng)燙烙部位吸取病變組織的液體，將病料注入滅菌的試管中，塞好棉塞送檢。

　　3，全血的采集方法：用滅菌注射器自雞的心臟或翅靜脈采血2-5毫升，注入滅菌試管中。建議加入少量的抗凝劑（3.8%枸櫞酸鈉0.1-0.5毫升或檸檬酸鈉液，配制方法：葡萄糖2.05g、檸檬酸鈉0.8g、檸檬酸0.055g、氯化鈉0.42g，加蒸餾水至100ml高壓滅菌10磅/10分鐘。）

　　4，血清的采集方法：用滅菌注射器自禽的心臟或翅靜脈采血2毫升，注入滅菌的1.5ml離心管中擺成斜面，待血液凝固血清析出后，將血清吸出注入另一個(gè)滅菌試管中，備用。

　　5，腸道及腸內(nèi)容物的采集方法：選擇病變明顯部位的腸道，將內(nèi)容物棄掉，用滅菌生理鹽水沖洗干凈，然后將病料放入盛有滅菌的30%甘油鹽水緩沖液中送檢。亦可將腸管切開(kāi)，用滅菌生理鹽水沖洗干凈，然后用燒紅的手術(shù)刀片燙烙粘膜表面，將接種針插入粘膜層，取少量病料接種于培養(yǎng)基上。采集腸內(nèi)容物則需用燒紅的手術(shù)刀片燙烙腸道漿膜層，將接種針插入腸道內(nèi)，吸取少量腸內(nèi)容，放入試管中或?qū)в心c內(nèi)容的腸道兩端扎緊，去掉其它部分送檢。

　　6，皮膚及羽毛的采集：皮膚要選病變明顯部分的邊緣，采取少許放入滅菌的試管中送檢；羽毛也要選病變明顯部分，用滅菌的刀片刮取羽毛及根部的皮屑少許，放入滅菌的試管中送檢；采集孵化室的絨毛需用滅菌鑷子采取出雛機(jī)出風(fēng)口的絨毛3-5克，放入滅菌的試管中送檢。

　　三、各種病料的采集部位

　　表1雞病毒性疾病主要采集的主要部位

　　四、病料的保存和處理 

　　1，采集的樣品應(yīng)一種樣品一個(gè)容器，立即密封，防止樣品損壞、污染和外泄等意外發(fā)生。也可以根據(jù)表1將幾種適合檢測(cè)同種病毒的病料合并于一個(gè)容器內(nèi)。

　　2，裝樣品的容器應(yīng)貼上標(biāo)簽，標(biāo)簽要防止因凍結(jié)而脫落，標(biāo)簽標(biāo)明采集的時(shí)間、地點(diǎn)、號(hào)碼和樣品名稱，并附上發(fā)病、死亡等相關(guān)資料，盡快送實(shí)驗(yàn)室。

　　3，根據(jù)樣品的性狀檢驗(yàn)要求的不同，作暫時(shí)的冷藏、冷凍或其它處理。

　　4，病料采集后，應(yīng)先存放于冰箱中1-2小時(shí)后，再做微生物檢驗(yàn)。 

　　五、病料的送檢要點(diǎn) 

　　1，在沒(méi)有條件的情況下，可以采取運(yùn)送整雞、鵝或鴨尸體，運(yùn)送時(shí)用浸透消毒液的布包好，裝入塑料袋中運(yùn)送；如果需要長(zhǎng)途運(yùn)輸，整個(gè)尸體放入冰箱冰凍過(guò)夜。

　　2，裝在容器中的病料應(yīng)先密封，然后裝入冰桶中運(yùn)送，放入冰袋運(yùn)送。

　　3，運(yùn)送的病料必須標(biāo)明：送檢單位、地址、送檢病料的品種、性別、日齡、種類、數(shù)量、死亡日期、送檢日期、檢驗(yàn)?zāi)康?、送檢者姓名，并附臨床病例摘要（發(fā)病時(shí)間、死亡情況、臨床癥狀、產(chǎn)蛋及飲食情況、免疫和用藥情況等）。

　　4，運(yùn)送病料時(shí)一定注意病料要低溫保存。供病毒學(xué)檢驗(yàn)的樣品，數(shù)小時(shí)內(nèi)要送到實(shí)驗(yàn)室，只作冷藏處理，超過(guò)數(shù)小時(shí)的要冷凍處理，可將樣品放入-30℃冰箱內(nèi)凍結(jié)后再裝入有大小冰塊或干冰的冷藏瓶（箱）內(nèi)運(yùn)送，亦可將裝入樣品的容器放入隔熱保溫瓶?jī)?nèi)，再放入冰塊，然后按100ｇ冰塊加入食鹽約35克，立即將隔熱保溫瓶瓶口塞緊，瓶?jī)?nèi)溫度可達(dá)-21℃左右。