雞腎炎病毒的分離培養(yǎng)

　　1、細(xì)胞培養(yǎng) ANV不能在鴨胚成纖維細(xì)胞或其他已建立的哺乳類細(xì)胞系(如Hela、Vero、PK-15和MDCK)中生長。

　　一般是用雞腎細(xì)胞(CKC)進(jìn)行ANV的培養(yǎng)與增殖，能夠產(chǎn)生細(xì)胞病變(CPE)；病料接種已長成單層的細(xì)胞，感染后24小時(shí)病毒滴度最高，在接種后72小時(shí)細(xì)胞出現(xiàn)圓細(xì)胞型CPE，但不產(chǎn)生包涵體和血凝素。

　　2、雞胚接種 選擇6日齡的SPF雞胚或無ANV抗體的胚進(jìn)行卵黃囊接種，感染后3～14天內(nèi)死亡，雞胚全身性出血、水腫、絨毛尿囊膜肥厚，生長停滯；接種9天以后才死亡的雞胚，其胎兒嚴(yán)重發(fā)育不良，比正常胎兒要明顯小得多；如果經(jīng)絨毛尿囊膜突進(jìn)接種，則胎兒很少發(fā)生死亡。病毒分離物能通過50納米微孔濾膜。

　　3、易感雞接種試驗(yàn) 對1日齡SPF雛雞用處理過的病料或用胚胎制備的50％組織懸液經(jīng)腹腔內(nèi)接種不表現(xiàn)臨床癥狀，但生長停滯；而經(jīng)口腔接種，可在感染后3—7天腎臟出現(xiàn)肉眼可見病變。用特異性的抗ANV熒光抗體染色受感染腎臟組織切片或細(xì)胞培養(yǎng)物檢查病毒抗原，可以作為疾病早期診斷的一種手段。