吳樹康1 楊皓2(1.山東省龍口市畜牧獸醫(yī)工作站;2.中南民族大學(xué)生命科學(xué)院)
一 試驗(yàn)材料和方法
1 藥敏試紙的制備
藥敏紙片的制備:取杭州富陽(yáng)特種紙廠生產(chǎn)的直徑18cm的定量濾紙,用打孔器打成直徑為6mm的圓形紙片,取100片圓形紙片放入清潔干燥的青霉素空瓶中,瓶口以單層牛皮紙包扎,120℃干燥滅菌2小時(shí)備用。
藥液的制備:按獸藥說明書上標(biāo)明的治療量比例配制藥液。如規(guī)格為100g的抗菌物,包裝說明兌水200千克,即用天平稱藥物1g加50mL的滅菌注射水置于滅菌器皿內(nèi),充分溶解后吸出1mL置于另一個(gè)滅菌容器中,再加入39mL的滅菌注射水。
藥敏紙片的制作:將含有100片紙片的青霉素瓶?jī)?nèi)加入配置好的藥液0.5mL,并翻動(dòng)紙片,使各紙片充分浸透藥液,同時(shí)在瓶口上記錄藥物名稱,放37℃溫箱內(nèi)過夜,干燥后即密封,切勿受潮,置陰暗干燥處存放備用。
2 細(xì)菌的分離培養(yǎng)與鑒定
細(xì)菌的分離培養(yǎng):采用常規(guī)法將細(xì)菌病料接種于麥康凱培養(yǎng)基上,37℃培養(yǎng)24小時(shí)。挑取單個(gè)菌落于普通瓊脂平板上進(jìn)行純培養(yǎng),37℃培養(yǎng)24小時(shí)。挑取單個(gè)菌落進(jìn)行革蘭氏染色、鏡檢,鏡下可見大量散在的紅色、中等大小、兩端鈍圓的無(wú)芽孢直桿菌,初步確定為大腸桿菌。
生化試驗(yàn):取待檢菌培養(yǎng)物分別接種在蛋白胨水、緩沖蛋白胨水、枸櫞酸鹽、葡萄糖、乳糖、麥芽糖、甘露醇、蔗糖、尿素瓊脂、三糖鐵瓊脂、半固體瓊脂培養(yǎng)基上,置37℃恒溫箱中,培養(yǎng)24小時(shí)。結(jié)果顯示:能發(fā)酵葡萄糖、乳糖、麥芽糖、甘露醇,產(chǎn)酸。尿素酶試驗(yàn)陰性,不產(chǎn)生H2S,有鞭毛,能運(yùn)動(dòng)。符合大腸桿菌的生化特性,證實(shí)確為大腸桿菌。
3 藥敏試驗(yàn)
將麥康凱培養(yǎng)基上認(rèn)定的大腸桿菌菌落,無(wú)菌環(huán)境下用接種環(huán)挑出,均勻涂布在營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上,同時(shí)等距離放置以下藥敏紙片:諾氟沙星、環(huán)丙沙星、頭孢噻肟、氨芐西林、多粘菌素、頭孢曲松、氟苯尼考,置恒溫箱中培養(yǎng)24小時(shí),按以下標(biāo)準(zhǔn)判定藥物敏感度。
二 試驗(yàn)結(jié)果
藥敏試驗(yàn)結(jié)果為:本次分離的大腸桿菌對(duì)頭孢噻肟、氟苯尼考、頭孢曲松、多粘菌素高敏以上,對(duì)環(huán)丙沙星中度敏感,對(duì)諾氟沙星和氨芐西林不敏感。
三 臨診推廣應(yīng)用
根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果,我們對(duì)前來(lái)就診的發(fā)生肉雞大腸桿菌病的養(yǎng)殖戶進(jìn)行指導(dǎo)治療,都受到很好效果。如我市七甲鎮(zhèn)姜良宏肉雞場(chǎng)先后購(gòu)進(jìn)兩批雛雞各5000只,第一批雞20日齡時(shí)出現(xiàn)發(fā)病,經(jīng)實(shí)驗(yàn)室診斷為大腸桿菌病,按常規(guī)用慶大霉素飲水治療一周后,雖然停止了死亡,但仍有部分肉雞排稀便,先后死亡500余只,花醫(yī)藥費(fèi)1000余元。第二批肉雞于22日齡發(fā)病,經(jīng)實(shí)驗(yàn)室診斷仍為大腸桿菌病,通過藥敏試驗(yàn),選用了抑菌效果高敏的氟苯尼考全群拌料治療,僅3天就將病情基本控制,再無(wú)新病例出現(xiàn),之后繼續(xù)用藥兩天,雞群完全康復(fù)。僅死亡雛雞85只,醫(yī)藥費(fèi)僅用650元。
四 小結(jié)與討論
用自制藥敏試紙進(jìn)行藥敏試驗(yàn),能夠準(zhǔn)確找出病原體的高敏藥物,有的放矢地消滅病原體,從而克服了試探性或盲目性用藥,減少了損失,提高了禽病的防治效果。
自制藥敏試紙經(jīng)濟(jì),一方面可以有效地指導(dǎo)養(yǎng)殖戶防治禽病,另一方面對(duì)本單位的藥品經(jīng)營(yíng)也有一定的指導(dǎo)作用。
影響藥敏試驗(yàn)結(jié)果的因素有很多,如采集病料的部位、藥敏紙片或藥物濃度的變化、細(xì)菌培養(yǎng)條件是否達(dá)標(biāo)等等,所以試驗(yàn)過程一定要一絲不茍,認(rèn)真對(duì)待,才會(huì)有準(zhǔn)確的結(jié)果。
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