不同疫苗計量單位的意義與區(qū)別
在獸醫(yī)臨床,我們會發(fā)現(xiàn)不同類型的疫苗其抗原含量計量單位有所區(qū)別,比如豬瘟疫苗習(xí)慣用RID計量,支原體疫苗用CCU計量,本文我們將不同的計量單位做說明與區(qū)分。
CCU:顏色改變單位,CCU法通常用于很小,用一般的比濁法無法計數(shù)的微生物,如支原體等。因為支原體的液體培養(yǎng)物是完全透明的,呈現(xiàn)為清亮透紅色,因此無法用比濁法來計數(shù),并且支原體固體培養(yǎng)很困難,用CFU法也不易計數(shù)。
原理是:支原體在特定的培養(yǎng)基中的生長代謝過程將改變培養(yǎng)基的PH,由于添加了酸堿指示劑的原因,培養(yǎng)基將變色,通過將菌液倍比稀釋不同濃度,觀察顏色變化,便可得到該支原體菌液的最大代謝活力的稀釋倍數(shù),即為該菌液的CCU。
CFU:菌落形成單位,豬丹毒、副豬等菌苗常用的計量單位。是指在活菌培養(yǎng)計數(shù)時,由單個菌體或聚落成團的多個菌體在固體培養(yǎng)基上生長繁殖所形成的集落,用來表達活菌的數(shù)量。菌落形成單位的計量方式與一般的計數(shù)方式不同,一般直接在顯微鏡下計算細菌數(shù)量會將活與死的細菌全部算入,但是CFU只計算活的細菌。因此,通常將菌液倍比稀釋成不同濃度,每種濃度分別培養(yǎng)計數(shù)后,乘以稀釋倍數(shù),取平均值,從而獲得更高的精準度。
RID:兔體感染量,感染一只正常兔子所用的劑量。按照能夠引起兔子出現(xiàn)定型熱的最大稀釋倍數(shù),確定為疫苗的抗原含量。由于豬瘟病毒在細胞上不會出現(xiàn)細胞病變,難以用TCID50測定。而國外使用的豬體半數(shù)感染量(PD50),在國內(nèi)受制于合格實驗豬有限,很難開展,所以國內(nèi)通常使用兔體感染量,來計量豬瘟病毒。
TCID50:半數(shù)組織感染劑量,又稱50%組織細胞感染量,用于計算病毒。表示能導(dǎo)致50%的培養(yǎng)細胞發(fā)生病變的病毒量。TCID50所測的不是病毒顆粒的數(shù)目,而是病毒感染反應(yīng)的有或無,嚴格來說,它是一種定性測定法。但是因為感染反應(yīng)的有或無與病毒顆粒數(shù)目之間有一定定量關(guān)系,且該法靈敏度高,更為方便,所以廣泛用于病毒的定量測定。不過由于實際操作中是通過不同倍比稀釋后,統(tǒng)計接種細胞出現(xiàn)的病變數(shù)量,再運用統(tǒng)計學(xué)公式計算得出,所以精準度略差于PFU(空斑試驗)。
PFU:空斑形成單位,計量病毒的一種單位,限用于有產(chǎn)生空斑能力的病毒。與TCID50測定不同的是,其能更精準的表示病毒的實際數(shù)量,兼具定性和定量。
原理是:用少量有破壞宿主細胞能力的病毒去感染已經(jīng)形成的致密單層狀態(tài)的宿主細胞群體時,經(jīng)過一定培養(yǎng)時間,使每個感染細胞周圍的細胞逐漸感染崩潰,形成肉眼可見的空斑。
理論上,一個病毒體可以形成一個空斑,但實際上有不同程度誤差,因此不能準確的與其他計量單位互換,不過通常0.7PFU約等于1.0TCID50。
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