影響雞傳染性支氣管炎診斷的因素

　　很少有方法可用于傳染性支氣管炎 (IB) 診斷，以識(shí)別當(dāng)前感染中的病毒或病毒感染后的特異性抗體反應(yīng)。由于多種因素的影響，選擇成功檢測(cè)雞傳染性支氣管炎病毒(IBV)的最佳檢測(cè)方法是困難且令人困惑的，如下所述。

　　1.臨床體征

　　IBV 的臨床癥狀與其他呼吸道感染相似，但有一些獨(dú)特的病變是毒株變異的一部分，難以與其他呼吸道病毒感染區(qū)分開(kāi)來(lái)。盡管臨床癥狀根據(jù)圖譜進(jìn)行匹配，但血清學(xué)研究從未根據(jù)解剖病變進(jìn)行匹配。

　　血清學(xué)滴度偶爾有升高趨勢(shì)，但與臨床癥狀不符；因此，IBV確認(rèn)是有問(wèn)題的。因此，構(gòu)象診斷是基于農(nóng)場(chǎng)記錄中數(shù)據(jù)的積累，包括雞蛋質(zhì)量和產(chǎn)量曲線、死亡率、血清轉(zhuǎn)化或抗體水平、疫苗接種報(bào)告和血液血清學(xué)，這些是通過(guò)PM病變同時(shí)匹配IBV雞的癥狀的臨床體征。 IBV 分離的樣本采集最好立即進(jìn)行，因?yàn)榕R床癥狀很明顯。逆轉(zhuǎn)錄 RNA 的 PCR 是檢測(cè)活動(dòng)性感染中 IBV 的有效方法。一些研究表明，營(yíng)養(yǎng)缺乏是檢測(cè) IBV 的一個(gè)重要考慮因素。

　　2.疫苗接種

　　疫苗接種是IBV鑒定的主要影響因素，因?yàn)樗枰腥镜腎BV疫苗株和其他強(qiáng)毒株。對(duì)于未接種疫苗的雞群，可以通過(guò) RT-PCR、RT-qPCR 或幾周后的陽(yáng)性 IBV 滴度簡(jiǎn)單地檢測(cè)到現(xiàn)場(chǎng)攻擊。因此，由于血液中的抗體循環(huán)，在已接種疫苗的雞群中識(shí)別現(xiàn)場(chǎng)挑戰(zhàn)或主動(dòng)感染非常困難。如今，疫苗株可以通過(guò)使用滅活油乳劑疫苗的區(qū)分感染者與接種動(dòng)物（DIVA）技術(shù)來(lái)區(qū)分疫苗株與現(xiàn)場(chǎng)毒株，該技術(shù)可以通過(guò)簡(jiǎn)單的中和試驗(yàn)、酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(ELISA)和間接免疫熒光試驗(yàn)進(jìn)行檢測(cè)。

　　3.檢測(cè)選擇

　　診斷技術(shù)的選擇對(duì)于與樣本采集和采樣數(shù)量相關(guān)的正確診斷非常重要。先進(jìn)的 ELISA 測(cè)試可以區(qū)分疫苗接種產(chǎn)生的抗體和感染產(chǎn)生的抗體。

　　感染后2-4周后抗體滴度濃度趨于異常升高;在隨后的幾周內(nèi)滴度逐漸緩慢下降。隨后，下一次血樣應(yīng)在2周后采集，但不得晚于4周，在同一受感染的房屋中采集，因?yàn)橛捎诿庖呦到y(tǒng)需要時(shí)間來(lái)建立免疫力，因此滴度延遲到最高水平。

　　感染后3-5天內(nèi)，受感染組織中病毒濃度最高;需要選擇分子測(cè)定和病毒分離來(lái)代替血清學(xué)監(jiān)測(cè)。目前，常見(jiàn)的分子方法已應(yīng)用于 IBV 診斷，特別是 RT-PCR，但I(xiàn)BV分離更具挑戰(zhàn)性、耗時(shí)，并且只能從受感染的雞中分離，因?yàn)樾枰诤唠u蛋中進(jìn)行多次傳代，直到病毒復(fù)制。或者，由于引物結(jié)合位點(diǎn)頻繁發(fā)生突變，各種類型的變體可能會(huì)逃避識(shí)別，因此需要經(jīng)常更新引物以應(yīng)用于分子測(cè)定。

　　4.血清學(xué)

　　平均滴度提供了接種疫苗后雞群內(nèi)受測(cè)禽類抗體反應(yīng)的信息。平均滴度應(yīng)達(dá)到可預(yù)測(cè)的范圍，正常雞群的平均滴度分布均勻，患病雞群的滴度無(wú)意中更高。

　　一項(xiàng)研究表明，疫苗免疫的抗體模式不應(yīng)因現(xiàn)場(chǎng)感染而被破壞。感染后，當(dāng)?shù)味人奖纫呙缃臃N后預(yù)期水平高至少2倍或感染前平均滴度水平至少 2 倍時(shí)，幾何平均滴度(GMT)應(yīng)異常增加。有時(shí)，接種疫苗后平均滴度會(huì)逐漸升高；然而，正常生產(chǎn)時(shí)未發(fā)現(xiàn)任何臨床癥狀，表明疫苗具有良好的保護(hù)作用和更好的反應(yīng)。

　　根據(jù)一般參數(shù)，滅活疫苗接種后變異百分比系數(shù)（CV）保持在40%以下，活疫苗接種后保持在60%以下，表明疫苗接種均勻性良好。當(dāng)CV小于20%時(shí)，滴度水平表現(xiàn)出良好的均勻性，但指定了以前的疾病暴露或良好的疫苗接種。因此，有必要與死亡率、臨床體征和生產(chǎn)記錄進(jìn)行交叉比對(duì)，以最終確認(rèn)IBV。對(duì)CV百分比的良好評(píng)估顯著低于疫苗接種后的預(yù)期水平或顯著低于早期感染病例的水平。因此，單次注射 IBV 活疫苗后CV%低于30% 則被指定為可疑挑戰(zhàn)。相反，在接種高免疫原性 IBV 變種疫苗后，CV百分比通常低于45%。在這種情況下，在接種滅疫苗之前，首先使用一系列多重活疫苗接種來(lái)促進(jìn)禽類100%血清轉(zhuǎn)化，這是影響滴度持久性而不是CV百分比測(cè)量的主要原則。

　　5.器官選擇和樣本質(zhì)量

　　上呼吸道(UTI)是IBV復(fù)制的主要部位；隨后，病毒血癥導(dǎo)致病毒增殖并通過(guò)血液循環(huán)傳播到其他組織 。由于受感染或免疫雞群的持續(xù)交叉感染，IBV可在盲腸扁桃體和腎臟中長(zhǎng)期持續(xù)存在。在急性病例中，臨床癥狀是在呼吸道中發(fā)現(xiàn)的，這是匯集樣本的首選地點(diǎn)。此外，在產(chǎn)蛋階段接種疫苗的雞的慢性感染中選擇了腎臟、盲腸扁桃體和泄殖腔樣本，而在呼吸道中可以預(yù)測(cè)到少量病毒。收集器官應(yīng)更快地冷藏，以保留病毒活力以進(jìn)行進(jìn)一步的分子診斷。如果沒(méi)有冷凍或冷藏設(shè)施，樣品應(yīng)在 50% 甘油中保存幾天。

　　6.感染期間的免疫和挑戰(zhàn)

　　血清學(xué)監(jiān)測(cè)可以直接幫助評(píng)估禽類的免疫狀態(tài)、病毒攻擊和病毒感染持續(xù)時(shí)間。不同類型的商業(yè) ELISA 試劑盒使用不同的截止值和數(shù)學(xué)公式來(lái)計(jì)算以轉(zhuǎn)換 ELISA 結(jié)果。農(nóng)業(yè)中增強(qiáng)免疫力以控制 IBV 感染的最常見(jiàn)做法是先接種減毒活疫苗，然后接種具有正常滴度水平的滅活疫苗，以提供良好的 IBV 保護(hù)。

　　IBV 攻擊通常會(huì)在感染后 6-8 周后檢查異常高的 IBV 滴度時(shí)顯示呼吸道癥狀。對(duì)于種雞，計(jì)算受攻擊雞的正常指導(dǎo)是感染后的平均滴度至少是疫苗接種滴度(基線)預(yù)期的 2 或 3 倍，如圖所示圖A、B 。對(duì)于肉雞，攻擊中通常會(huì)顯示異常的 IBV 滴度，而在活疫苗接種與正常血清學(xué)相關(guān)后，感染后的平均滴度應(yīng)超過(guò) 3-4 K (Idexx 標(biāo)準(zhǔn))，如圖分別為C、D。

　　在 ELISA 檢測(cè)中，應(yīng)根據(jù)疫苗接種計(jì)劃、IBV 的地理分布、爆發(fā)歷史、特定疫苗和檢查的禽類類型，通過(guò)預(yù)期的疫苗接種滴度來(lái)確定診斷。這些各自的因素與定期雞群報(bào)告的組合相關(guān)，以確定血清學(xué)結(jié)果是正常還是異常。許多因素影響抗體水平，特別是病毒株，以及與雞有關(guān)的一些因素(例如，品種、類型、年齡、免疫狀態(tài)和營(yíng)養(yǎng))、疫苗(例如，減毒水平、劑量、活的或死的)疫苗，和儲(chǔ)存條件)和疫苗接種時(shí)間表(例如，正確的時(shí)間表、準(zhǔn)備和給藥途徑)。

　　圖2 比較兩個(gè)肉種雞舍中 ( A ) 攻擊雞群和 ( B ) 正常雞群 26 周時(shí)的 IBV 血清學(xué)分析。計(jì)算出受攻擊雞群的平均滴度是正常雞群的三倍，并且與之前使用美國(guó)Symbiotic檢測(cè)試劑盒進(jìn)行的血清學(xué)檢測(cè)相比，變異系數(shù)(CV%)太低。產(chǎn)蛋高峰期 IBV 感染后的高挑戰(zhàn)滴度幾乎位于單個(gè)條形中。在肉雞中，( C ) 在 35 日齡觀察到的 IBV 感染后高攻擊滴度超過(guò) 3-4 K 滴度，計(jì)算為 IBV 感染后，與 ( D ) 正常血清學(xué)相比，基于美國(guó) Idexx ELISA 檢測(cè)試劑盒的標(biāo)準(zhǔn)。

　　7.遺傳學(xué)和免疫抑制

　　遺傳性狀對(duì)IBV的抵抗力和易感性影響很大。一些實(shí)驗(yàn)研究表明，IBV 免疫后不同育種品系中發(fā)現(xiàn)了不同的遺傳性狀、死亡率、病毒生長(zhǎng)和可變的組織病理學(xué)。但由于雞系間的易感性存在差異，不同的檢測(cè)方法存在一定的差異。一些免疫抑制感染與 IBV 疾病的惡化有關(guān)，例如傳染性法氏囊病 (IBD)、馬立克氏病 (MD)、包涵體肝炎 (IBH) 和雞傳染性貧血 (CIA) 可能會(huì)抑制幼年時(shí)的免疫狀態(tài)，這可以通過(guò)刺激法氏囊和胸腺中的淋巴細(xì)胞耗竭來(lái)擾亂 IBV 的獲得性疫苗免疫，從而導(dǎo)致對(duì)攻擊的更高抵抗力。主要損害受到亞臨床感染的影響，因此很難理解免疫抑制劑。

　　用于確認(rèn) IBV 感染的實(shí)驗(yàn)室診斷方法涉及其他呼吸道病毒，這些病毒需要連續(xù)的血清學(xué)監(jiān)測(cè)來(lái)確定當(dāng)前感染的實(shí)際來(lái)源。同樣，環(huán)孢素被歸類為T(mén)細(xì)胞免疫抑制藥物，可顯著降低禽類的免疫力，并且在IBV感染中受到高度刺激。

　　來(lái)源：雞保姆，作者：Md. Safiul Alam